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摘要
为建立口蹄疫病毒（foot-and-mouth disease virus，FMDV）快速、高效的血清学检测方法，根据GenBank收录的FMDV-O型国内流行株VP1基因（登录号：JN998085.1），构建重组质粒pCold TF-VP1，通过原核表达系统获得VP1蛋白。通过SDS-PAGE和Western-blotting鉴定蛋白表达和反应原性后，将纯化后的蛋白作为抗原，建立FMDV抗体间接ELISA方法。结果显示，重组质粒成功转入大肠杆菌BL21（DE3）感受态细胞中，并以可溶性蛋白形式表达。建立的FMDV抗体间接ELISA方法其抗原包被最佳浓度0.5 μg/mL，使用1%BSA溶液封闭效果最佳，血清最佳稀释度1:600，酶标二抗最佳工作浓度1:8000，且具有良好的特异性、灵敏性和重复性，与商品化试剂盒比较，符合率为90.2%。本试验在大肠杆菌中成功表达并纯化了FMDV的VP1蛋白，并建立了FMDV抗体间接ELISA方法，为口蹄疫的监测、诊断及试剂盒的开发提供了参考。
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