人参皂苷Rg3抑制人骨肉瘤143B细胞的增殖、迁移和侵袭并促进其凋亡

作者：毛筱涵; 靳雅倩; 丰天宇; 王豪; 刘丹; 袁仁杰; 武娟; 莫洲沛; 左国伟^*

来源：肿瘤, 2020, 40(04): 233-244.

• 骨肉瘤
• 人参皂甙
• 细胞增殖
• 细胞凋亡
• 细胞运动

目的:探讨人参皂苷Rg3对骨肉瘤143B细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭的影响及可能的作用机制。方法 :用梯度浓度的Rg3(40、50、60、70和80μmol/L)处理143B细胞(以用DMSO处理143B细胞作为对照组)24、48和72 h,采用MTT法和克隆形成实验检测Rg3对143B细胞活力及增殖的影响,并计算Rg3对143B细胞的半数抑制浓度(half-maximal inhibitory concentration,IC50)值,筛选最适药物浓度和作用时间。Hoechst 33258染色法和FCM法分别检测Rg3对143B细胞凋亡及细胞周期的影响;细胞划痕愈合实验和Transwell小室实验分别检测Rg3对细胞迁移和侵袭能力的影响;实时荧光定量PCR法检测增殖标志物增殖细胞核抗原(proliferatingcellnuclearantigen,PCNA)mRNA的表达水平;蛋白质印迹法检测增殖标志物PCNA、凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax和剪切型(cleaved)-Casepase 3,细胞迁移和侵袭相关标志基质金属蛋白酶2(matrix metalloproteinase-2,MMP-2)和MMP-7的表达水平;最后,用荧光素酶基因报告系统筛选Rg3参与调控的信号通路;蛋白质印迹法检测环磷酸腺苷反应元件结合蛋白(cAMPresponseelementbindingprotein,CREB)信号通路中相关蛋白蛋白激酶B(protein kinase B,PKB,又称AKT)、CREB及其磷酸化蛋白的表达水平。结果 :与对照组相比,Rg3浓度为40、50、60、70和80μmol/L时均可以抑制143B细胞的增殖,且这种抑制作用与浓度和作用时间呈正相关(P值均<0.001),Rg3对143B细胞的IC50值为(51.00±3.46)μmol/L。Rg3能下调增殖标志分子PCNAmRNA和蛋白的表达水平(P值均<0.05)。另一方面,Rg3又可促进143B细胞的凋亡并抑制其迁移和侵袭(P值均<0.05)。Rg3处理后的143B细胞中抑凋亡蛋白Bcl-2的表达水平下调(P <0.01),促凋亡蛋白Bax和cleaved-Caspase 3的表达水平上调(P值均<0.05);侵袭相关蛋白MMP-2和MMP-7的表达水平下调(P值均<0.05);同时CREB转录活性下降(P值<0.001),CREB信号通路中AKT及CREB磷酸化水平均明显下降(P值均<0.05)。结论 :Rg3可以抑制143B细胞的增殖、迁移和侵袭,并诱导其凋亡,且这种作用可能与抑制CREB信号通路的激活有关。

• 单位
  基础医学院; 重庆医科大学