双碱基延伸法结合荧光偏振法快速检测新甲型H1N1耐药位点方法的建立

作者：房师松; 柴燕文; 王昕; 吕星; 吴春利; 程小雯; 张仁利; 薛红; 程锦泉

来源：中国人兽共患病学报, 2014, 30(02): 175-179.

DOI：10.3969/cjz.j.issn.1002-2694.2014.02.014

• 新甲型H1N1病毒
• NA基因
• SNP
• 双碱基延伸
• 荧光偏振
• 耐药

目的建立一种利用双碱基延伸法与荧光偏振技术(Fluorescence polarization,FP)快速检测甲型H1N1流感病毒NA基因耐药突变位点的新方法。方法从GenBank随机下载30条甲型H1N1的NA(neuraminidase)基因序列,通过MEGA分析,利用Primer Premier软件设计3条特异引物,其中一对引物通过RT-PCR用于扩增含有耐药位点H275Y的NA基因,第3条引物是应用双碱基延伸终止法与荧光偏振技术检测NA基因对达菲类药物耐药位点H275Y的突变情况,再随机选取50株甲型H1N1流感病毒进行检测,与测序结果进行比对,验证检测结果的准确性。结果 50株甲型H1N1流感病毒的NA蛋白第275位氨基酸均为组氨酸,未发生H Y的替换,在灵敏度与特异性方面,与传统的基因测序结果一致性均达100%。结论本方法操作简便、敏感性及特异性高、判读结果直观明确、检测费用低,能实现对耐药位点突变的快速、准确检测,可应用于与SNP相关疾病的快速分型和突变位点的实时监测和临床检测。

• 单位
  深圳市疾病预防控制中心