番茄叶片酵母双杂交cDNA文库的构建及Pti互作蛋白筛选

作者：王洋; 王莹莹; 张政; 冯国栋; 周宇; 牛向丽

来源：合肥工业大学学报(自然科学版), 2021, 44(10): 1420-1424.

DOI：10.3969/j.issn.1003-5060.2021.10.020

• 番茄
• 丁香假单胞杆菌番茄致病变种(Pst DC3000)
• 酵母双杂交
• 文库筛选
• 蛋白质相互作用

酵母双杂交技术作为检测蛋白质之间相互作用的有效手段,不仅能验证与已知蛋白质的相互作用,还可从文库中筛选与特定蛋白互作的未知蛋白。文章为研究番茄抗病相关蛋白Pti (Pto interaction protein)的生物学功能,筛选与其互作的蛋白,以未处理野生型番茄叶片、真空渗透法接种丁香假单胞杆菌番茄致病变种DC 3000(Pseudomonas syringae pv.tomato DC3000,Pst DC3000)的感病株系prf3、抗性株系PtoR的植株叶片提取RNA,构建酵母双杂交文库。经检测,文库容量为1.25×10～7 CFU,阳性率大于95%,插入片段平均长度约1 200 bp。通过构建Pti5重组诱饵载体并转化酵母菌,筛选与其相互作用的蛋白质。初步获得的Pti5互作的靶标基因,可用于进一步研究番茄抗病基因Pti的作用机制。

• 单位
  食品与生物工程学院; 合肥工业大学