TGF-β上调Notch3诱导上皮间质转化在促进肺癌骨转移中的作用

作者：杨雪; 冯征; 张宁; 王亚芳; 赵正维; 周勇安

来源：现代肿瘤医学, 2016, 24(18): 2851-2857.

DOI：10.3969/j.issn.1672-4992.2016.18.005

• Notch3
• TGF-β
• 上皮间质转化
• 骨转移
• 非小细胞肺癌

目的:研究TGF-β上调Notch3表达诱导EMT在肺癌骨转移中的作用。方法:免疫荧光、蛋白印记和RT-PCR方法检测Notch3在TGF-β诱导下上皮、间质标记物以及上皮间质转化相关转录因子Twist、Snail和ZEB-1的表达变化;利用慢病毒包装Notch3正义表达载体和ZEB-1 siRNA载体分别上调Notch3和抑制ZEB-1的表达后,采用免疫荧光、蛋白印记方法检测抑制EMT转录因子ZEB-1的表达后,对上皮间质标记物的影响;进而通过体外迁移和侵袭试验观察抑制ZEB-1的表达后对Notch3高表达细胞系的迁移和侵袭能力的影响;最后体外ELISA法检测骨转移相关分子p THr P和IL-6的表达,探讨Notch3通过诱导EMT在促进肺癌骨转移中的作用。结果:Notch3 siRNA抑制其表达后能够逆转TGF-β诱导的上皮标记物和间质标记物的表达变化,这一现象是通过影响EMT转录因子ZEB-1实现的。进而利用慢病毒包装系统,构建了Notch3过表达细胞株和ZEB-1 siRNA细胞株,免疫荧光和蛋白印记试验发现,Notch3过表达载体能够抑制上皮标记物的表达,上调间质标记物的表达,促进EMT的发生,而抑制ZEB-1的表达后能够逆转这一现象。最后,体外侵袭试验和ELISA试验发现,Notch3高表达能够增加肺癌细胞的侵袭能力以及p THr P和IL-6的分泌,而抑制ZEB-1的表达后可明显降低其转移能力以及p THr P和IL-6的分泌。结论:Notch3参与了TGF-β诱导肺癌细胞上皮间质转化过程,并在NSCLC骨转移中发挥作用。

• 单位
  第四军医大学; 唐都医院