鹦鹉幼稚病PCR诊断方法的建立与应用

作者：朱小甫; 吴旭锦^*; 张文娟; 熊忙利; 邢蕾

来源：动物医学进展, 2020, 41(05): 19-24.

DOI：10.16437/j.cnki.1007-5038.2020.05.004

• 鹦鹉幼稚病
• PCR诊断
• 多瘤病毒
• 序列分析

建立一种鹦鹉幼稚病(BFD)PCR诊断方法,为临床快速确诊鹦鹉幼稚病提供技术手段。参考GenBank中公开的BFDV基因组序列,设计了2对用于阳性质粒构建引物和1对检测引物,采用套式PCR从临床疑似病料中扩增BFDV VP1基因,构建VP1基因阳性质粒,以阳性质粒为模板,优化检测引物扩增体系与条件,进行灵敏度试验、特异性检测和临床样品检测,挑选3份不同地区阳性样品测序验证。结果显示,成功构建了BFDV VP1基因阳性质粒pGEM-T-VP1,建立的PCR检测方法检测下限为105.8copies/μL。用该方法检测时仅能以pGEM-T-VP1为模板扩增到目的条带,检测5种常见禽病毒均为阴性。应用建立的方法对75份疑似病料进行检测,结果19份为阳性,阳性率为25.3%。测定了3株不同地区BFDV流行毒株VP1基因片段序列,比对分析发现核苷酸序列同源性为99.4%～100%,在基因进化树上这3株病毒处在一个独立的分支上,显示出一定的地域特征。成功建立了一种灵敏度高、特异性好的BFD PCR诊断方法,应用于临床诊断显示出良好效果。

• 单位
  咸阳职业技术学院