越橘离体腋芽小滴玻璃化超低温保存

作者：李娴; 张志东; 刘海广; 陈丽; 李亚东; 孙海悦

来源：吉林农业大学学报, 2024, 46(04): 589-599.

DOI：10.13327/j.jjlau.2020.1009

• 越橘
• 腋芽
• 小滴玻璃化
• 超低温保存
• 遗传稳定性

以越橘试管苗“密斯梯”的腋芽为材料，筛选了小滴玻璃化超低温保存过程中的各项技术参数；用8种66份越橘基因型验证该方法的广谱性；用10个ISSR引物检测超低温保存后5个品种再生株系遗传稳定性。结果表明：从30 d苗龄试管苗切取长1～1.5 mm单腋芽茎段分别在继代培养基（WPM+0.3 mg/L ZT+7 g/L琼脂+30 g/L蔗糖，SCM）和预培养基（WPM+7 g/L琼脂+0.3 mol/L蔗糖，PCM）上各培养1 d[(25±2)℃黑暗]；腋芽用加载液（WPM+2.0 mol/L甘油+1.0 mol/L蔗糖，LS）处理30 min（室温），然后浸入植物玻璃化保护溶液Ⅱ（WPM+300 g/L甘油+150 g/L乙二醇+150 g/L二甲基亚砜+0.4 mol/L蔗糖，PVS2）中40 min(0℃)；在铝箔纸上制成小滴（1腋芽/小滴）之后投入液氮中保存；取出的材料立即用卸载液（WPM+1.2 mol/L蔗糖，ULS）处理20 min（室温）；在SCM上腋芽黑暗培养1 d后转至正常条件下再生培养。广谱性验证结果为平均成活率81.3%和再生率47%。5个越橘品种的分子标记检测结果显示未出现特异性条带。

• 单位
  吉林农业大学