肾癌G250基因和hGM-CSF基因双顺反子表达质粒的构建及鉴定

作者：李科; 李君武; 苏泽轩; 刘艳

来源：中国现代医学杂志, 2009, (08): 1176-1179+1182.

• 肾癌
• G250
• hGM-CSF
• 基因佐剂 renal carcinoma
• G250
• hGM-CSF
• bicistronic
• gene adjuvant

目的应用分子生物学技术,构建pIG250-GM双顺反子真核表达质粒并进行测序鉴定。方法从肾癌组织中提取总RNA,采用RTPCR技术扩增肾癌G250抗原的基因编码区序列,同时从质粒pORF-hGM-CSF中扩增出基因佐剂hGM-CSF,分别克隆到真核表达载体pIRES的多克隆位点A(MCSA)和B(MCSB)中,构建pIG250-GM真核表达质粒,并进行酶切鉴定。结果酶切鉴定提示插入的基因片段大小分别为1.44kμ和0.47kμ,测序分析表明克隆的G250和hGM-CSF序列与GenBank上公布序列完全一致。结论成功构建双顺反子表达pIGM-G250质粒,为研究G250-GMCSF基因负载的DC疫苗防治肾癌提供了必要的实验基础。

• 单位
  暨南大学; 暨南大学附属第一医院