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摘要
【目的】研究α-亚麻酸（ALA）对水牛卵巢颗粒细胞体外培养过程中细胞活力、细胞凋亡、细胞周期相关基因表达及激素分泌功能的影响。【方法】为了筛选体外培养水牛卵巢颗粒细胞ALA最适浓度，在96孔板中加入起始细胞数量为1×10～4/mL的水牛卵巢颗粒细胞，细胞贴壁12 h后更换含0（对照组）、10、50、100、200μmol/L ALA的培养液，在相同条件下处理24 h,用CCK-8进行细胞活力检测，筛选出最适处理浓度，并用于后续试验。后续试验分为对照组（0μmol/L）和处理组（50μmol/L）两组，用实时荧光定量PCR检测颗粒细胞中B淋巴细胞瘤-2（Bcl-2）、半胱氨酸蛋白酶-3（Caspase-3）、细胞周期蛋白依赖性激酶抑制蛋白1（p21）和增殖细胞核抗原（PCNA）基因的相对表达量，用免疫荧光对颗粒细胞中细胞凋亡相关蛋白Caspase-3和细胞周期相关蛋白p21进行荧光检测和定量分析，用ELISA法检测培养液中水牛颗粒细胞分泌的雌二醇（E2）和孕酮（P4）含量。【结果】与对照组相比，水牛卵巢颗粒细胞经ALA处理24 h后，在10～50μmol/L范围内随着ALA浓度升高水牛卵巢颗粒细胞的细胞活力随之升高，处理浓度为50μmol/L时细胞活力相比对照组极显著提高（P0.05）,但促凋亡基因Caspase-3和细胞周期基因p21在mRNA和蛋白水平上的表达量均极显著降低（P2和P4水平显著或极显著增高（P<0.05;P<0.01）。【结论】培养液中添加50μmol/L ALA能够提升水牛卵巢颗粒细胞增殖活力、抗凋亡能力及激素分泌能力，本研究为调控水牛卵泡发育提供理论参考。
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单位广西壮族自治区水牛研究所; 中国农业科学院广西水牛研究所; 动物科技学院; 广西农业职业技术学院
