一种高效重组表达限制性内切酶的方法

作者：高嵩; 张坤晓; 许恒皓; 李肖; 胡艳红; 张颖; 吴胜月

来源：2017-01-17, 中国, CN201710035737.0.

一种高效重组表达限制性内切酶的方法,包括如下步骤：(1)先将限制性内切酶基因插入,再将载体转化导入大肠杆菌,筛选培养、测序,获得限制性内切酶的重组表达质粒,质粒载体为利用乳糖操纵子和T7启动子调控,IPTG诱导的pET系列表达载体；(2)将限制性内切酶的重组表达质粒转化至BL21(DE3)pLysS感受态细胞中,筛选获得限制性内切酶的重组表达菌株；(3)扩大培养限制性内切酶的重组表达菌株并诱导表达限制性内切酶。本发明方法利用葡萄糖对乳糖操纵子表达系统本底表达的抑制作用,以及BL21(DE3)pLysS菌株自身对乳糖操纵子表达系统本底表达的严苛控制作用,省略了对宿主DNA的甲基化保护步骤,不仅大大简化了重组表达过程,可以应用于多种限制酶的重组表达。