山羊地方性鼻内肿瘤病毒ENTV-2FJ株的分离纯化和全基因组序列分析

作者：江锦秀; 林裕胜; 张靖鹏; 游伟; 黄丽丽; 毛坤明; 胡奇林^*

来源：农业生物技术学报, 2020, 28(02): 313-324.

• 山羊地方性鼻内肿瘤病毒(ENTV-2)
• 纯化
• 电镜观察
• SDS-PAGE
• 全基因组测序

近几年山羊地方性鼻内肿瘤病毒(Enzootic nasal tumour virus of goats, ENTV-2)引起的山羊地方性鼻内肿瘤病(enzootic nasal adenocarcinoma, ENA)在我国多省均有报道。为了丰富山羊(Capra hircus)ENTV-2的分子流行病学资料,本研究采集患病羊的鼻液,用差速离心结合蔗糖密度梯度离心纯化ENTV-2FJ株,进行电镜观察和SDS-PAGE;取纯化的病毒,用反转录(reverse transcription PCR, RT-PCR)方法分段扩增出山羊鼻内肿瘤病毒福建株(ENTV-2FJ)的7条c DNA片段,并对其全基因组序列进行了克隆测序(Gen Bank No. MK559457)分析。ENTV-2FJ株经过纯化后,在电镜下看到病毒粒子呈球形,直径为90～110 nm,有囊膜和纤突;经SDS-PAGE分析,ENTV-2FJ株的蛋白显示9条带,分子量分别为118、79、60、51、28、20、16、13和11 ku。ENTV-2FJ株全基因组序列长7 469 bp,与ENTV四川株(ENTV-2SC)、ENTV陕西株(ENTV-2Shaanxi)、ENTV陕西株2 (ENTV-2Shaanxi2)、ENTV陕西株3 (ENTV-2Shaanxi3)、及ENTV陕西株4 (ENTV-2Shaanxi4)的同源性分别为95.1%、95.4%、95.1%、94.9%和95.4%;经ENTV-2全基因组、群相关抗原(group associated antigen, gag)和囊膜蛋白(envelope protein, env)基因核苷酸序列构建的进化树分析发现,ENTV-2FJ株与ENTV-2SC、ENTV-2Shaanxi、ENTV-2Shaanxi2、ENTV-2Shaanxi3和ENTV-2Shaanxi4处于同一进化分支。上述结果为ENTV-2检测方法的建立和遗传变异研究等提供了理论依据。

• 单位
  福建师范大学; 福建省农业科学院