MicroRNA-129促进骨髓间充质干细胞向心肌分化的实验研究

作者：路喆鑫; 连锋; 薛松; 朱洪生

来源：中国胸心血管外科临床杂志, 2013, 20(05): 570-576.

• 骨髓间充质干细胞
• 心肌分化
• microRNA-129
• 糖原合成酶激酶

目的研究microRNA-129(mir-129)对骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BM-MSCs)向心肌分化过程中的促进作用及其机制。方法分离培养SD大鼠骨髓间充质干细胞,通过慢病毒转染使细胞获得过表达基因分为4组:对照组(MSCs);慢病毒空转组(Lentiviral vectors+MSCs,Lv-MSCs);mir-129单转染组(mir-129-MSCs);mir-129+糖原合成酶激酶(GSK-3β)双转染组(mir-129+GSK-3β-MSCs)。以10μmol/L浓度的5-氮杂胞苷(5-Aza)诱导MSCs向心肌细胞分化后,分别以第1 d、5 d、10 d、15 d和20 d为时间点,采用realtime-PCR检测GATA-4、NKx2.5、MEF-2C的mRNA水平,以第10 d、15 d、20 d为时间点,用蛋白质印迹法(Western blotting)检测肌钙蛋白I(cTnI)、结蛋白(Desmin)、GSK-3β以及磷酸化β-catenin与非磷酸化β-catenin的表达量。结果与对照组比较,随着研究时间点的推移,mir-129单转染组反映心肌分化的相关标记物基因和蛋白水平明显升高,GSK-3β的表达水平则显著降低,非磷酸化β-catenin/磷酸化β-catenin比值升高;当MSCs同时过表达mir-129和GSK-3β时,相关的心肌标记物基因和蛋白均低于mir-129单转染组,非磷酸化β-catenin/磷酸化β-catenin比值明显降低。结论过表达mir-129能够促进MSCs向心肌细胞分化,可能的机制是通过抑制GSK-3β的生成,从而削弱了对β-catenin的磷酸化抑制,后者游离入核开启调控干细胞下游的心肌分化途径。

• 单位
  上海交通大学医学院附属仁济医院