NTE酯酶活力域真核表达载体的构建及其表达

作者：常平安; 陈瑞; 李薇; 伍一军

来源：毒理学杂志, 2005, (03): 169-171.

DOI：10.16421/j.cnki.1002-3127.2005.03.001

• 遗传载体
• 神经病变靶标酯酶:酯酶活力域
• 哺乳动物细胞

目的构建人神经病变靶标酯酶(NTE)酯酶活力域(NESP)真核表达载体,并在细胞中表达。方法利用含有特定酶切位点的引物,通过PCR扩增出其酯酶活力域,经T载体克隆测序正确后,双酶切回收cDNA片段定向插入到pcDNA3·1(+)中,通过酶切鉴定其真核表达载体的构建。然后将其转染到真核细胞中,通过NTE活力测定,检测其表达效果。结果经PCR获得了NTE的1·6kb酯酶活力域的cDNA片段,T载体克隆后测序证实完全正确,然后克隆到真核表达载体中获得了NTE酯酶活力域真核表达载体pcDNA-NEST。瞬时转染到COS7和SH-SY5Y细胞中,NTE的活力与对照细胞相比显著提高。结论成功构建了NEST真核表达载体,并在哺乳动物细胞中表达。

• 单位
  中国科学院动物研究所; 农业虫害鼠害综合治理研究国家重点实验室