人来源α-1,3/1,6甘露糖转移酶Alg2的异源表达及活性测定

作者：胥欣欣; 王春迪; 陈帅; 高晓冬^*

来源：食品与生物技术学报, 2021, 40(02): 78-85.

• N-糖基化
• Alg2蛋白
• 甘露糖基转移酶
• 液质联用

在N-糖基化途径中,双功能型的甘露糖转移酶Alg2蛋白催化两个甘露糖分别以α-1,3/1,6连键组装到多萜醇寡糖Man1GlcNAc2-PP-Dol上,形成Man3GlcNAc2-PP-Dol。作者探究人来源的Alg2蛋白(hAlg2)在酿酒酵母中的体内功能和在大肠杆菌中表达并纯化后的体外活性。构建酿酒酵母w303a-GAL1pr-ALG2,并利用该菌株的生长被葡萄糖抑制的特点,发现过表达h ALG2基因能够回补其生长缺陷,证实了h ALG2和Sc ALG2的功能同源性。作者利用大肠杆菌表达系统,成功表达并纯化了TrxA-hAlg2,并以Man1GlcNAc2-PP-Phy(PPGn2M1)代替hAlg2的天然底物,测定了其体外活性。结合液质联用的方法,检测发现TrxA-hAlg2具有催化PPGn2M1生成PPGn2M2和PPGn2M3的甘露糖基转移酶活性,为建立基于大肠杆菌表达纯化的h Alg2体外反应体系奠定了基础。

• 单位
  江南大学; 生物工程学院