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摘要
解毒活血汤出自王清任《医林改错》,是国医大师张琪教授根据急性肾损伤（acute kidney injury, AKI）热毒瘀滞病机从古方中筛选出应用临床数十年的有效方剂，该文拟从调控铁死亡（ferroptosis）角度阐释解毒活血汤对AKI的治疗作用及其潜在机制。将32只雄性C57BL/6小鼠随机分为4组：正常组、模型组及解毒活血汤低、高剂量组，每组8只。由于临床AKI的治疗普遍以支持或替代疗法为主，尚无特效药，故该实验未设置阳性药物组。解毒活血汤低剂量组对应0.5倍的临床等效剂量，高剂量组则对应临床等效剂量，予以每日晨间灌胃，连续干预7 d;正常组及模型组小鼠分别灌以相应体积的纯水。给药第5天时，除正常组外其余各组小鼠均按20 mg·kg-1的剂量腹腔注射顺铂溶液进行造模，正常组给予生理盐水注射。造模72 h后取材，留取小鼠血清及肾脏组织，检测血清肌酐（serum creatinine, Scr）、尿素氮（blood urea nitrogen, BUN）水平以评价小鼠肾脏功能变化；酶联免疫吸附测定（enzyme-linked immunosorbent assay, ELISA）法检测血清肾损伤分子1（kidney injury molecule 1,KIM-1）的表达水平；苏木素-伊红（hematoxylin-eosin, HE）染色法观察小鼠肾组织病理学改变；过碘酸雪夫（periodic acid-Schiff, PAS）染色法观察肾脏糖原沉积变化；普鲁士蓝染色观察肾组织铁沉积水平；生化比色法检测肾组织中还原型谷胱甘肽（glutathione, GSH）含量、超氧化物歧化酶（superoxide dismutase, SOD）以及过氧化氢酶（catalase, CAT）活力。采用Wes-tern blot法检测小鼠肾组织中酰基辅酶A合成酶长链家族成员4（acyl-CoA synthetase long chain family member 4, ACSL4）、溶血磷脂酰胆碱酰基转移酶3（lysophosphatidylcholine acyltransferase 3, LPCAT3）及Hippo通路关键分子Yes相关蛋白（Yes-associated protein, YAP）蛋白表达；免疫组化法检测YAP在肾组织中的定位与相对表达；再采用实时荧光定量PCR法检测ACSL4及谷胱甘肽过氧化物酶4（glutathione peroxidase 4, GPX4）mRNA表达。结果显示，与正常组相比，顺铂诱导的AKI小鼠血清中Scr、BUN、KIM-1水平显著升高；肾组织病理显示，模型组小鼠肾小管上皮细胞发生显著萎缩坏死脱落，肾小管刷状缘消失，管内大量蛋白管型填充，小管空泡样变性，肾间质增宽且可见水肿，肾脏结构严重损伤，肾小管损伤评分显著升高；肾组织部分区域有明显的铁沉积；肾组织GSH含量、SOD及CAT活力显著降低；同时，肾组织中铁死亡标志分子ASCL4、LPCAT3显著升高，GPX4显著降低，YAP显著上调。与模型组相比，高剂量解毒活血汤可有效保护肾脏功能，降低Scr、BUN、KIM-1水平，减轻肾脏病理损伤及糖原沉积和铁沉积；提升肾组织中GSH含量、SOD及CAT活力。进一步的机制研究表明，解毒活血汤组ACSL4、LPCAT3及YAP蛋白表达较模型组显著降低，而GPX4水平显著升高。综上，解毒活血汤可以通过调控YAP/ACSL4信号通路抑制铁死亡，对顺铂诱导的AKI发挥保护作用。
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单位广州中医药大学第二附属医院; 广东省中医院; 医药学院; 黑龙江省中医药科学院; 广东省中医药科学院
