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摘要
目的探讨高迁移率族蛋白B1-晚期糖基化终末产物/Toll样受体-核转录因子-κB(HMGB1-RAGE/TLRs-NF-κB)信号通路在骨髓间充质干细胞(BMSC)移植治疗内毒素脂多糖(LPS)致凝血功能障碍大鼠中的作用。方法体外分离培养4～5周龄雌性SD大鼠BMSC,取第4代细胞鉴定成功后用于后续实验。按随机数字表法将大鼠分为生理盐水(NS)对照组、LPS组和BMSC组,每组15只。经大鼠大隐静脉注射LPS 1 mg/kg构建LPS致凝血功能障碍模型;NS对照组给予等量NS。BMSC组于制模后2 h经尾静脉注射BMSC 0.5 mL(含BMSC 1×106个);NS对照组和LPS组给予等量NS。分别于术后1、3、7 d取大鼠腹主动脉血,检测凝血功能指标[包括血小板计数(PLT)、血小板体积分布宽度(PDW)、平均血小板体积(MPV)、血小板压积(PCT)、大型血小板比例(P-LCR)、活化部分凝血活酶时间(APTT)、凝血酶原时间(PT)、凝血酶时间(TT)、国际标准化比值(INR)及纤维蛋白原(FIB)];分别采用实时反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)与酶联免疫吸附试验(ELISA)检测血中HMGB1、RAGE、TLR2/4及NF-κB的mRNA表达和含量。结果①体外培养细胞呈梭形或扁平型生长,第4代细胞表型经流式细胞仪鉴定为BMSC。②凝血功能指标:与NS对照组比较,LPS组1 d PLT、PCT、FIB即明显下降,PDW、MPV、P-LCP、INR即明显升高,APTT、PT、TT即明显延长;随LPS诱导时间延长,各项凝血指标均有所好转。给予BMSC干预后能明显逆转LPS诱导的凝血功能异常,1 d时各指标与LPS组比较差异即有统计学意义[PLT(×109/L):398.8±17.9比239.1±15.8,PCT(%):0.35±0.04比0.23±0.06,FIB(g/L):1.7±0.6比0.8±0.1,PDW(%):12.4±1.6比16.2±1.5,MPV(fl):11.0±1.6比13.7±1.1,P-LCR(%):13.0±2.1比15.3±2.7,INR:1.52±0.17比1.82±0.19, APTT(s):66.3±4.1比89.5±4.5,PT(s):18.3±0.7比25.1±1.9,TT(s):87.5±7.8比115.0±9.7,均P<0.05],并持续至7d。③HMGB1-RAGE/TLRs-NF-κB信号通路相关分子:与NS对照组比较,LPS组1 d血中HMGB1、RAGE、TLR2/4及NF-κB的mRNA表达和含量即明显升高;随LPS诱导时间延长,各通路分子mRNA表达及含量逐渐下降。给予BMSC干预后,1 d时各通路分子的mRNA表达及含量即较LPS组明显降低[HMGB1 mRNA(2-△△Ct):10.77±0.04比24.51±3.69, HMGB1含量(μg/L):0.48±0.01比0.95±0.06; RAGE mRNA (2-△△Ct):11.57±1.11比18.08±0.29, RAGE含量(μg/L):0.73±0.04比1.37±0.06;TLR2mRNA(-△△Ct):2.60±0.22比12.61±0.27,TLR2含量(μg/L):0.81±0.03比1.59±0.09;TLR4mRNA(2-△△Ct):2.95±0.52比4.06±0.11, TLR4含量(μg/L):0.80±0.09比1.18±0.11;NF-κB mRNA(2-△△Ct):1.29±0.06比7.79±0.25, NF-κB含量(μg/L):1.22±0.24比2.42±0.26;均P<0.05],并持续至7 d。结论 BMSC移植能够改善内毒素致凝血功能障碍大鼠的凝血功能,可能与抑制HMGB1-RAGE/TLRs-NF-κB信号通路活化有关。
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