过表达miR-17-92基因簇对前列腺癌细胞生物学特性的影响及机制

作者：周鹏; 马亮; 周珺; 徐晶晶; 刘菲; 国风

来源：中华肿瘤杂志, 2017, 39(05): 325-331.

• 前列腺肿瘤
• miR-17-92基因簇
• Bcl-2家族促凋亡蛋白
• 人第10号染色体缺失的磷酸酶及张力蛋白同源物
• 蛋白激酶B
• 细胞外调节蛋白激酶

目的探讨过表达miR-17-92基因簇对前列腺癌细胞生物学特性的影响及潜在机制。方法采用过表达miR-17-92基因的质粒转染包装细胞,并构建过表达miR-17-92基因簇的前列腺癌DU145-17-92细胞。采用xCelligence系统实时动态监测DU145-control和DU145-17-92细胞的生长能力,采用Ki-67抗原检测技术和原位末端转移酶标记技术(TUNEL)分别检测DU145-control和DU145-17-92细胞中细胞增殖和凋亡情况,采用流式细胞术分析DU145-control和DU145-17-92细胞的细胞周期,采用Western blot检测DU145-control和DU145-17-92细胞中凋亡相关蛋白和增殖相关蛋白的表达。结果 xCelligence系统监测显示,从接种24 h后,DU145-17-92细胞的生长速度显著高于DU145-contol细胞(P<0.01)。细胞培养24、48、72 h后,DU145-control组的Ki-67阳性细胞率分别为(56.57±1.68)%、(85.48±0.26)%和(90.85±2.08)%,DU145-17-92组的Ki-67阳性细胞率分别为(73.64±0.68)%、(93.43±1.23)%和(97.36±0.86)%,两组仅在培养24 h时差异有统计学意义(P<0.01)。细胞培养24、48、72 h后,DU145-control组的细胞凋亡率分别为(6.76±0.09)%、(14.51±0.86)%和(20.73±1.64)%,DU145-17-92组的细胞凋亡率分别为(1.86±0.15)%、(7.90±0.40)%和(4.92±0.48)%,差异均有统计学意义(均P<0.01)。Western blot检测显示,DU145-control和DU145-17-92细胞中,Bcl-2家族促凋亡蛋白(BIM)的表达水平分别为0.83±0.00和0.16±0.00,人第10号染色体缺失的磷酸酶及张力蛋白同源物(PTEN)蛋白的表达水平分别为0.91±0.00和0.13±0.00,差异均有统计学意义(均P<0.01)。过表达miR-17-92基因簇促进了蛋白激酶B(Akt)中丝氨酸473位点(p-Akt-473)的磷酸化,但对308位点(p-Akt-308)的磷酸化无明显影响。DU145-control和DU145-17-92细胞中磷酸化细胞外信号调节激酶(p-ERK)蛋白的表达水平分别为0.21±0.01和0.72±0.01,差异有统计学意义(P<0.01)。结论过表达miR-17-92基因簇能显著影响DU145细胞的生长、增殖、凋亡和细胞周期等生物学特性,这与凋亡调控相关蛋白BIM和抑癌蛋白PTEN表达的下调有关,Akt和ERK信号通路的活化及凋亡相关蛋白表达水平的失调也起着重要的作用。

• 单位
  苏州大学附属第一医院