分泌型碱性磷酸酶示踪的TA克隆真核表达载体的构建

作者：张洪海; 计云霞; 孙玉; 张玉林; 乔录新; 崔丹; 陈德喜

来源：北京医学, 2010, (06): 443-446.

DOI：10.15932/j.0253-9713.2010.06.001

• T载体
• 真核表达
• 载体构建 T vector Eukaryotic expression Vector construction

目的制备具有分泌型碱性磷酸酶示踪作用和真核表达功能的TA克隆载体。方法把CMV启动子区-TA克隆位点-BGH多聚腺苷酸区序列克隆到pSEAP2-control载体中,构建成具有真核表达功能并外分泌碱性磷酸酶(SEAP)的pcDNA5AP-前T载体。增强型绿色荧光蛋白(EGFP)基因克隆到pcDNA5AP-T载体上并进行EGFP表达分析和SEAP活性检测。结果 pcDNA5AP-EGFP以400ng/孔转染6孔板293T细胞,EGFP表达率达50%,SEAP活性比对照组高20倍。结论成功构建了具有真核表达功能并外分泌碱性磷酸酶的pcDNA5AP-T载体。

• 单位
  首都医科大学附属北京佑安医院