干扰微小RNA-320表达通过蛋白激酶B/哺乳动物雷帕霉素通路保护高糖诱导的胰岛β细胞损伤

作者：刘朱美卉; 陈晓宇; 杨元芳

来源：安徽医药, 2021, 25(10): 2039-2043.

• 胰腺疾病
• 微小RNA-320
• 高糖刺激
• 胰岛β细胞损伤
• 蛋白激酶B/哺乳动物雷帕霉素
• 小鼠

目的探讨微小RNA-320(miR-320)在高糖诱导的胰岛β细胞损伤中的作用和分子机制。方法本研究起止时间为2019年1月至2020年1月。小鼠胰岛β细胞株MIN6细胞购于中国科学院典型培养物保藏中心,将其分为对照组、高糖组、高糖+miRNA抑制剂阴性对照(anti-miR-NC)组、高糖+miR-320抑制剂(anti-miR-320)组、高糖+蛋白激酶B/哺乳动物雷帕霉素(Akt/mTOR)通路抑制剂(LY294002)组、高糖+anti-miR-320+LY294002组。实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测miR-320的表达水平。噻唑蓝(MTT)法、流式细胞术分别检测细胞存活和凋亡;酶联免疫吸附测定(ELISA)试剂盒检测乳酸脱氢酶(LDH)的活力;蛋白质印迹法(Western blotting)检测磷酸化Akt(p-Akt)、磷酸化的mTOR复合物1(p-mTORC1)的表达水平。结果与对照组比较,高糖组胰岛β细胞miR-320表达升高[(2.69±0.14)比(0.98±0.06)],存活率降低[(54.03±4.34)%比(99.74±9.16)%],凋亡率[(20.80±1.83)%比(7.75±0.86)%]、LDH活力[(257.76±18.94)U/L比(104.31±10.98)U/L]升高,p-Akt[(0.22±0.01)比(0.65±0.04)]和p-mTORC1蛋白[(0.18±0.02)比(0.51±0.03)]表达降低;与高糖+anti-miR-NC组比较,高糖+anti-miR-320组胰岛β细胞miR-320表达[(1.43±0.06)比(2.76±0.12)]降低,存活率[(89.43±7.11)%比(54.01±4.21)%]升高,凋亡率[(10.95±1.10)%比(20.72±1.76)%]、LDH活力[(139.77±13.24)U/L比(258.21±20.73)U/L]降低,p-Akt[(0.43±0.02)比(0.23±0.01)]和p-mTORC1蛋白[(0.32±0.02)比(0.18±0.01)]表达升高;与高糖组比较,高糖+LY294002组胰岛β细胞存活率[(33.60±3.67)%比(53.97±4.96)%]降低,凋亡率[(32.13±2.02)%比(20.89±2.23)%]、LDH活力[(337.05±24.15)U/L比(257.95±19.10)U/L]升高。与高糖+anti-miR-320组比较,高糖+anti-miR-320+LY294002组胰岛β细胞存活率[(64.00±5.77)%比(89.54±7.10)%]降低,凋亡率[(18.77±1.89)%比(10.93±1.12)%]、LDH活力[(223.38±23.35)U/L比(139.75±13.44)U/L]升高(P<0.05)。结论干扰miR-320表达能够减轻高糖诱导的胰岛β细胞损伤,其机制与激活Akt/mTOR信号通路有关。

• 单位
  郑州大学第一附属医院