达兰猪精原干细胞的分离、纯化和初步鉴定

作者：薛振华; 刘国世; 史建民; 王梁; 田秀芝; 王永彬; 侯保民; 田见晖; 曾申明; 朱士恩

来源：中国农业大学学报, 2008, (02): 1-6.

• 达兰猪
• 精原干细胞
• 分离
• 纯化
• 精原细胞 porcine
• spermatogonial stem cell
• separation
• purification
• spermatogonia

对达兰仔猪睾丸精原细胞及精原干细胞进行了体外分离、纯化和初步鉴定。对8 d达兰仔猪的睾丸实质组织,采用Ⅳ型胶原酶、透明质酸酶和胰酶组合消化法分离精细管细胞,制备单细胞悬液,用Percoll不连续密度(11%、19%、27%、35%和43%)梯度法纯化精原细胞;对纯化后的细胞培养12 h,细胞贴壁后进行碱性磷酸酶(AKP)染色鉴定,初步确定精原干细胞及其比例。结果表明:所获精细管细胞悬液中活细胞和死细胞所占的比率分别为92.65%和7.35%,平均每克睾丸可获得4.17×107个细胞;精原细胞主要分布于19%~27%的Percoll梯度带中,经纯化后其纯度为47.62%,精原干细胞占该带细胞的比...

• 单位
  中国农业大学; 农业生物技术国家重点实验室