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摘要
目的:观察电针对脑缺血模型大鼠miR-126-3p及哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)/缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)信号通路的影响，探讨电针疗法对脑缺血后血管新生的调控机制。方法:SD大鼠随机分为对照组、模型组、电针组和抑制剂组，每组按治疗时程分为3、7、14 d共3个亚组，各亚组12只。采用Zea Longa法建立右侧大脑中动脉缺血(MCAO)大鼠模型。电针组予“大椎”“百会”电针治疗，疏密波，频率2 Hz/20 Hz,强度0.5 mA,20 min/次，术后4 h开始电针治疗，1次/d,分别治疗3、7、14 d。抑制剂组在电针治疗的基础上予腹腔注射mTOR特异性抑制剂雷帕霉素(0.1 mg/mL),每次0.3 mg/kg, 1次/d,分别注射3、7、14 d。改良神经功能缺损评分(mNSS)评估大鼠神经功能缺损情况，透射电镜观察大鼠缺血半暗区皮层神经元及微血管内皮超微结构，免疫组织化学法检测大鼠缺血半暗区皮层内皮微血管密度(MVD),Western blot法和荧光定量PCR法分别检测大鼠缺血半暗区皮层mTOR、HIF-1α蛋白及其mRNA和miR-126-3p的表达。结果:与同时点对照组比较，模型组大鼠mNSS升高(P<0.01),缺血半暗区皮层神经元及微血管内皮细胞水肿，细胞结构损坏明显，MVD值与缺血半暗区皮层mTOR、HIF-1α蛋白及mRNA表达均升高(P<0.01), miR-126-3p表达降低(P<0.01)。与同时点模型组比较，两干预组mNSS显著降低(P<0.01,P<0.05),缺血半暗区皮层神经元与微血管内皮细胞超微结构有不同程度改善且电针组更佳，两治疗组3、14 d时MVD值升高(P<0.01),电针组7 d时MVD值升高(P<0.05),两干预组缺血半暗区皮层mTOR、HIF-1α蛋白及mRNA及miR-126-3p表达均升高(P<0.01,P<0.05)。与同时点电针组比较，抑制剂组MVD值降低(P<0.05,P<0.01),缺血半暗区皮层mTOR、HIF-1α蛋白及mRNA及miR-126-3p表达均降低(P<0.01)。与本组4 h和3、7 d时比较，模型组、电针组、抑制剂组mNSS评分均在14 d时最低(P<0.01);与本组3 d时比较，模型组、电针组、抑制剂组7、14 d时MVD值和缺血半暗区皮层mTOR蛋白表达均升高(P<0.01,P<0.05);与本组3、7 d时比较，模型组和电针组14 d时缺血半暗区皮层mTOR mRNA、miR-126-3p表达均升高(P<0.01,P<0.05);与本组3 d时比较，抑制剂组7、14 d时缺血半暗区皮层mTOR、HIF-1αmRNA表达升高(P<0.01)。结论:电针“大椎”“百会”穴可显著提高MCAO大鼠缺血半暗区皮层mTOR、HIF-1α表达，其作用机制可能是通过激活miR-126-3p表达进而靶向调控mTOR/HIF-1α信号通路，最终促进血管新生，从而发挥其脑保护效应。
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