乙型脑炎病毒微滴式数字 PCR检测方法的建立及初步应用

作者：阚乃鹏; 王金章; 骆婧; 杨劲松^*

来源：海峡预防医学杂志, 2023, 29(04): 56-59.

• 乙型脑炎病毒(JEV)
• 微滴式数字PCR(ddPCR)
• 实时荧光定量PCR(qPCR)
• 病原学监测

目的 建立微滴式数字PCR(ddPCR)检测方法，用于乙型脑炎病毒(Japanese encephalitis virus, JEV)的核酸检测。方法 设计特异性扩增JEV的引物探针并优化条件建立ddPCR检测方法，检测其他病毒核酸，观察有无交叉反应判断其特异性。用实时荧光定量PCR(qPCR)与ddPCR法分别对梯度稀释后JEV体外转录核酸进行检测以评价方法的敏感性；用不同浓度的病毒核酸进行独立重复实验以评价方法的重复性；用乙型脑炎IgM抗体阳性标本评价临床标本，健康人血清用于阴性验证。结果 本法检测与其他病毒核酸无交叉反应；RT-qPCR和RT-ddPCR方法对JEV的最低检出限分别为100和10-1,对应分别为6.73 copies/μL和0.75 copies/μL;各浓度检测拷贝数变异系数均在2.0%以下，检出率为100.0%;12份乙型脑炎IgM抗体阳性标本中检出7份阳性(58.3%),健康人血清的阴性率为100.0%。结论 本研究建立的RT-ddPCR检测JEV方法有较好的特异性、敏感性、重复性和临床标本适应性，可作为乙型脑炎病原学监测的一种技术手段。

• 单位
  生命科学学院; 福建省疾病预防控制中心; 福建师范大学