抑制miR-142-3p对奶山羊化学诱导乳腺上皮细胞泌乳功能的影响

作者：潘思尧; 张丹丹; 刘权辉; 王国栋; 吕丹薇; 黄奔^*

来源：中国畜牧兽医, 2023, 50(01): 58-66.

DOI：10.16431/j.cnki.1671-7236.2023.01.006

• 奶山羊
• 乳腺上皮细胞(MECs)
• miR-142-3p

【目的】探索miR-142-3p对奶山羊化学诱导乳腺上皮细胞(chemical induced mammary epithelial cells, CiMECs)体外泌乳功能的调节作用，旨在为促进转基因乳腺生物反应器的发展以及“培养皿奶”的商业化生产奠定基础和提供新的思路。【方法】选取奶山羊耳缘成纤维细胞(GEFs)为研究材料，经单一小分子化合物TGFβR-1/ALK5的抑制剂(RepSox)诱导8 d后，分别从细胞的形态变化、特异性标记物免疫荧光染色以及油红O染色对其进行鉴定。之后运用脂质体转染技术在诱导成功的奶山羊CiMECs中分别转染miR-142-3p的抑制物(miR-142-3p inhibitor)及抑制物对照(inhibitor-NC),不转染的细胞作为空白对照(BC),转染24 h后，采用实时荧光定量PCR检测miR-142-3p的表达水平，CCK-8法检测细胞的增殖率，Western blotting检测β-酪蛋白(β-casein)的表达量，甘油三酯酶法测定甘油三酯的含量。【结果】GEFs诱导8 d后形成岛屿状多核仁样的上皮样聚集；免疫荧光染色结果显示，诱导后的GEFs表达乳腺上皮细胞(MECs)的特异性标记物细胞角蛋白14(CK14)和CK18;油红O染色结果显示，诱导后的GEFs细胞质内弥散分布着大小不等被染上红色的脂滴，表明成功获得了具有泌乳功能的奶山羊CiMECs。奶山羊CiMECs转染试验结果显示，与空白对照组相比，miR-142-3p inhibitor组miR-142-3p的相对表达量显著降低(P<0.05),inhibitor-NC组miR-142-3p表达量无显著差异(P>0.05);miR-142-3p inhibitor组奶山羊CiMECs的增殖率、β-casein表达量及甘油三酯分泌量均显著增加(P<0.05),inhibitor-NC组奶山羊CiMECs的增殖率、β-casein表达量及甘油三酯分泌量均无显著差异(P>0.05)。【结论】GEFs经RepSox诱导8 d可成功转变为具有泌乳功能的奶山羊CiMECs,抑制miR-142-3p可显著促进奶山羊CiMECs的增殖并增加β-casein表达量及甘油三酯的分泌量，从而影响泌乳功能。

• 单位
  广西大学; 亚热带农业生物资源保护与利用国家重点实验室