赭曲霉毒素A单克隆抗体的体外制备及其重组抗体的构建研究

作者：李蓉芳; 吴箫; 王何瑶; 盛玲; 张珍; 何庆华^*

来源：食品安全质量检测学报, 2023, 14(06): 118-126.

DOI：10.19812/j.cnki.jfsq11-5956/ts.2023.06.009

• 赭曲霉毒素A
• 单克隆抗体
• 重组抗体
• 真核表达

目的 实现抗赭曲霉毒素A(ochratoxinA,OTA)单克隆抗体的体外制备及其重组抗体表达载体的构建与瞬时转染表达。方法 以前期获得的OTA杂交瘤细胞株(O16)为研究对象,通过无血清驯化培养的方式开展OTA单克隆抗体的体外制备研究;采用简并引物法获取OTA杂交瘤细胞的单克隆抗体编码基因,在此基础上构建OTA重组全长抗体表达载体以及OTA重、轻链可变区基因片段与人源恒定区片段连接的重组嵌合抗体表达载体,并基于哺乳动物细胞系,开展两种重组抗体的瞬时转染表达研究。结果 通过缓降血清浓度的方式对OTA杂交瘤细胞进行无血清驯化,实现了体外培养制备OTA单克隆抗体;在此基础上测得OTA单克隆抗体的重链和轻链基因序列,并成功构建了OTA重组全长抗体表达载体(pCDNA3.4-OTA-H/L)和重组嵌合抗体表达载体(p FUSE-OTA-H/L),通过共转染实现了两者在哺乳动物细胞系中的瞬时转染表达;经间接酶联免疫吸附测定(enzyme linked immunosorbent assay, ELISA)确定体外培养制备的OTA抗体、OTA重组全长抗体和嵌合抗体均具备特异性结合抗原的能力,三者的线性检测范围分别为1.043～1.671、0.944～1.245、1.387～1.902 ng/mL,均保留了对OTA的特异性结合能力。结论 通过缓降血清的方式得到了适应无血清培养的OTA杂交瘤细胞,进而实现了体外培养制备OTA单克隆抗体;成功构建了OTA全长重组抗体及人源嵌合抗体的表达载体,并在哺乳动物细胞中实现了其重组抗体的瞬时转染表达。

• 单位
  南昌大学食品科学与技术国家重点实验室; 南昌大学