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摘要
基于Wnt/β-catenin信号通路探究邻苯二甲酸二乙基己酯（DEHP）在加重肝纤维化中的调控机制.选取60只雄性SD大鼠，随机分成6组：正常组、CCl_4造模组、CCl_4+DEHP(0.05、5和500 mg·kg~(-1)）暴露组和单独DEHP暴露（500 mg·kg~(-1)）对照组.通过皮下注射50%CCl_4(0.1 m L·100 g~(-1)）诱导肝纤维化模型，每周2次，同时从造模开始给予DEHP灌胃，共9周.采用HE和MASSON染色观察肝脏组织病理学变化和胶原沉积情况；采用ELISA法检测血清中透明质酸（HA）、层粘连蛋白（LN）、三型前胶原（PCⅢ）和Ⅳ型胶原（Ⅳ-C）的水平；免疫组化法和Western Blot法检测肝脏组织中Wnt/β-catenin信号通路蛋白的表达水平；体外将人肝星状细胞（LX-2）分为正常组，DEHP刺激组（50μmol·L~(-1)),DEHP刺激组（100μmol·L~(-1)）及DEHP(100μmol·L~(-1))+FH535(1μmol·L~(-1))(Wnt/β-catenin信号通路阻断剂）组，共培养24 h,RT-PCR法检测各组细胞中β-catenin和α-SMA m RNA的表达水平.体内实验结果显示，与正常组相比，CCl_4模型组中肝纤维化指标（HA、LN、PCⅢ、Ⅳ-C）的水平、肝组织病理损伤、胶原沉积以及肝组织中Wnt1、β-catenin蛋白的表达水平明显升高.与CCl_4模型组相比，随着DEHP暴露剂量的增加，肝纤维指标（HA、LN、PCⅢ、Ⅳ-C）及肝脏的病理损伤显著加重，并上调Wnt1、β-catenin的表达，尤其在CCl_4+DEHP(500 mg·kg~(-1)）组中较为明显；体外细胞实验结果显示，与正常组相比，DEHP(50、100μmol·L~(-1)）两个剂量组均能显著刺激LX-2细胞中β-catenin和α-SMA m RNA的表达，给予FH535(1μmol·L~(-1))(Wnt/β-catenin信号通路阻断剂）后，β-catenin和α-SMA m RNA表达水平明显降低，差异具有统计学意义，p<0.05.DEHP能显著加重肝纤维化大鼠的病理损伤和纤维化的形成，其机制可能与介导的Wnt/β-catenin信号通路有关.
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