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摘要
目的检测吉非替尼诱导前后肺癌干细胞miRNAs的表达差异情况,探讨miRNAs对肺癌干细胞吉非替尼耐药的影响。方法采用流式细胞边缘群分选技术从人肺癌细胞系A549中分离出肺癌干细胞。将肺癌干细胞置于含1μmol/L吉非替尼培养液中培养诱导5 d,采用miRNA芯片检测诱导前后肺癌干细胞中差异表达的miRNAs;实时荧光定量PCR(RT-PCR)验证miRNA芯片结果。将筛选出的miRNAs构建阻遏物和模拟物,并采用阳离子脂质体法转染至肺癌干细胞中(转染阻遏物的为抑制组,转染模拟物的为增强组)。同时将未经转染处理肺癌干细胞作为非转染组和转染无关序列的肺癌干细胞作为阴性对照组。噻唑蓝(MTT)法观察其对吉非替尼敏感性的影响。结果 miRNA芯片结果显示吉非替尼诱导前后肺癌干细胞中有19条表达改变大于2倍的miRNAs。其中上调的miRNAs有14条,下调的miRNAs有5条。RT-PCR验证的结果与芯片结果相符。将筛选出来的miR-21构建阻遏物和模拟物,并成功转染至肺癌干细胞中。结果显示:吉非替尼对抑制组转染后48 h肺癌干细胞的半数抑制剂量(IC50)明显低于非转染组和阴性对照组(P<0.05);吉非替尼对增强组转染后48 h肺癌干细胞的IC50值则明显高于非转染组和阴性对照组(P<0.05)。结论吉非替尼诱导前后肺癌干细胞中存在差异表达的miRNAs,调控肺癌干细胞miR-21的表达可以影响肺癌干细胞对化疗药物的敏感性。
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