三种猪腹泻相关病原微芯片检测方法研究及初步应用

作者：高志强; 汪琳^*; 蒲静; 赵相鹏; 尹羿; 任彤; 张伟; 刘凤华

来源：中国口岸科学技术, 2020, (10): 4-10.

• 猪腹泻相关病毒
• 微芯片
• 荧光(RT-)PCR

为同时快速筛查猪传染性胃肠炎病毒(Transmissible gastroenteritis virus, TGEV)、猪流行性腹泻病毒(Porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)以及猪圆环病毒2型(Porcine circovirus type 2, PCV2)3种可致猪腹泻的猪病病原,本研究基于微芯片技术,针对3种病毒特异性基因分别建立微量实时荧光(RT-)PCR检测体系,并将其组合在微芯片上。结果显示,该方法可特异性检出以上3种病毒核酸,但不能检出本实验室保存的其他5种猪病病毒核酸,而且相互之间无交叉反应;灵敏度试验显示TGEV和PEDV检测灵敏度均可达到1TCID50/0.1 mL,对于含PCV2全基因组质粒,检测极限为41 fg/μL。对237份送检样品的检测结果显示,PEDV和PCV2检出率分别为0.8%和7.2%,但未检出TGEV,与常规管式荧光(RT-)PCR检测结果一致。该项技术可大大降低筛查的试剂成本,因为每个反应池只需要1.2μL的(RT-)PCR试剂混合物,而且比传统的实时(RT-)PCR系统的热平衡和热均匀性更快。本研究表明该技术可用于猪相关疫病的快速检测和筛查。

• 单位
  北京农学院