miR-1254通过靶向CSF-1抑制胶质瘤细胞的增殖和侵袭能力

作者：陈亮; 秦军; 雷军荣; 刘俊; 王璐^*

来源：国际肿瘤学杂志, 2020, 47(10).

• 神经胶质瘤
• 巨噬细胞集落刺激因子
• 细胞增殖
• 肿瘤侵润
• miR-1254

目的探讨miR-1254及其靶基因巨噬细胞集落剌激因子-1(CSF-1)在胶质瘤组织、胶质瘤细胞中的表达, 以及miR-1254和CSF-1对胶质瘤细胞增殖和侵袭能力的影响。方法收集2017年4月至2019年5月在湖北省十堰市太和医院接受手术治疗的30例胶质瘤患者的临床病理标本以及癌旁组织, 采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测胶质瘤组织、癌旁组织以及细胞株U87和人脑正常胶质细胞HEB中miR-1254和CSF-1 mRNA的表达水平。将胶质瘤U87细胞分为空白对照组、mimic NC组、miR-1254 mimic组以及siRNA NC组、CSF-1 siRNA组。采用qRT-PCR检测各组细胞miR-1254及CSF-1的mRNA表达水平;采用Western blotting检测各组细胞CSF-1的蛋白表达水平;采用双荧光素酶报告基因实验验证miR-1254和CSF-1基因的靶向关系;采用CCK-8法和Transwell侵袭实验检测细胞的增殖和侵袭能力。结果胶质瘤组织中miR-1254 mRNA的相对表达量为0.44±0.16, 癌旁组织为1.15±0.28, 差异具有统计学意义(t=12.914, P<0.001);胶质瘤组织中CSF-1 mRNA的相对表达量为1.96±0.27, 癌旁组织为0.98±0.22, 差异具有统计学意义(t=14.970, P<0.001)。胶质瘤细胞U87中miR-1254 mRNA的相对表达量为0.39±0.11, 人脑正常胶质细胞HEB中为1.03±0.02, 差异具有统计学意义(t=10.113, P=0.008);胶质瘤细胞U87中CSF-1 mRNA相对表达量为1.02±0.03, 人脑正常胶质细胞HEB为0.32±0.13, 差异具有统计学意义(t=9.037, P=0.009)。转染miR-1254后, CSF-1 mRNA、蛋白的表达水平均随miR-1254表达水平的升高而降低。双荧光素酶报告基因实验结果显示, 与mimic NC组(1.04±0.12)比较, miR-1254 mimic组(0.31±0.02)CSF-1-WT细胞中荧光活性显著降低(t=10.430, P<0.001)。转染48 h后, 空白对照组(0.71±0.01)、mimic NC组(0.68±0.04)、miR-1254 mimic组(0.35±0.01)细胞增殖能力差异具有统计学意义(F=252.651, P<0.001);miR-1254 mimic组与空白对照组相比, 差异具有统计学意义(P<0.001);miR-1254 mimic组与mimic NC组相比, 差异具有统计学意义(P<0.001)。空白对照组(0.71±0.01)、siRNA NC组(0.68±0.04)、CSF-1 siRNA组(0.25±0.01)细胞增殖能力差异具有统计学意义(F=320.309, P<0.001);CSF-1 siRNA组与空白对照组相比, 差异具有统计学意义(P<0.001);CSF-1 siRNA组与siRNA NC组相比, 差异具有统计学意义(P<0.001)。侵袭实验结果显示空白对照组(365±27)、mimic NC组(388±24)、miR-1254 mimic组(83±15)细胞穿膜数差异具有统计学意义(F=173.915, P<0.001);空白对照组(365±27)、siRNA NC组(404±32)、CSF-1 siRNA组(87±14)细胞穿膜数差异具有统计学意义(F=141.294, P<0.001)。结论 miR-1254在胶质瘤组织和胶质瘤细胞株U87中的表达均显著下降, CSF-1在胶质瘤组织和胶质瘤细胞株U87中的表达均显著升高。过表达miR-1254可能通过靶向降低CSF-1的表达来抑制胶质瘤U87细胞的增殖和侵袭能力。

• 单位
  湖北医药学院; 湖北省十堰市太和医院