TET1过表达载体构建及其稳定过表达的宫颈癌HeLa细胞鉴定

作者：沈艳; 沈凤; 闫海洋; 徐殿琴; 丁妍; 谭玉洁

来源：山东医药, 2018, 58(16): 43-45.

• 宫颈癌
• Hela细胞
• 甲基胞嘧啶双加氧酶1
• 载体构建
• 脂质体转染

目的构建甲基胞嘧啶双加氧酶1(TET1)过表达载体并对其稳定过表达的宫颈癌HeLa细胞进行鉴定。方法从人宫颈癌组织中扩增出TET1目的片段并将其克隆到pLVX-MYRF载体上,构建真核表达载体pLVX-MYRF-TET1,进行双酶切及测序验证。选择宫颈癌HeLa细胞,随机分为TET1组、阴性对照组,采用脂质体转染法分别转染重组质粒pLVX-MYRF-TET1、空质粒pLVX-MYRF,采用Real-time PCR法和Western blotting法检测两组TET1 mRNA和蛋白表达。结果经双酶切分析及测序验证,成功构建了真核表达载体pLVX-MYRF-TET1。与阴性对照组比较,TET1组TET1 mRNA和蛋白相对表达量均明显升高(P均<0.05)。结论成功构建TET1过表达载体pLVX-MYRF-TET1,并且能在宫颈癌HeLa细胞中稳定过表达。

• 单位
  贵州医科大学; 湖北医药学院附属太和医院