微小RNA34a下调沉默信息调节因子1抑制内皮祖细胞功能的机制研究

作者：马璐; 王玉强; 何青; 杨秀红; 李明; 魏延津^*

来源：中国心血管杂志, 2019, 24(03): 259-263.

• 内皮祖细胞
• 氧化应激
• 微小RNA34a
• 沉默信息调节因子1

目的分析氧化应激过程中微小RNA34a(mi R-34a)下调沉默信息调节因子1(SIRT1在内皮祖细胞功能障碍中的机制。方法本实验采用不同浓度的过氧化氢(H2O2)处理内皮祖细胞,通过CCK-8检测细胞的存活率;运用化学合成的方法合成mi R-34a模拟物、mi R-34a抑制物及其各自对照组转染至内皮祖细胞后,并用500μM H2O2刺激,用RT-PCR验证mi R-34a表达水平,利用流式细胞仪检测H2O2刺激mi R-34a诱导细胞凋亡情况,通过q RT-PCR方法和Western blot技术检测SIRT1中m RNA和蛋白的表达水平。结果 CCK-8检测发现,细胞存活率随着H2O2浓度的增加而逐渐降低,呈现浓度依赖性;与不加H2O2相比,加入100、200、500和800μM的H2O2细胞存活率分别为94%±2%、85%±2%、78%±2%和32%±1%,差异具有统计学意义(F=16. 3,P<0. 001)。H2O2刺激内皮祖细胞后,转染mi R-34a模拟物的表达水平高于其对照组(t=16. 0,P=0. 003),转染mi R-34a抑制物的表达水平低于其对照组(t=53. 0,P=0. 000)。通过细胞凋亡检测mi R-34a模拟物组细胞凋亡率明显升高(t=30. 4,P<0. 001),mi R-34a抑制物组细胞凋亡率明显降低(t=8. 7,P<0. 001)。q RT-PCR结果显示,mi R-34a模拟物组中的靶基因SIRT1相对表达量低于其对照组(t=87. 7,P<0. 001),mi R-34a抑制物组中的靶基因SIRT1相对表达量高于其对照组(t=125. 0,P<0. 001)。Western blot结果显示mi R-34a的模拟物与其对照组相比,SIRT1蛋白表达量明显下降(t=4. 1,P=0. 014),而mi R-34a的抑制物与其对照组相比,SIRT1蛋白表达明显增高(t=7. 1,P=0. 002)。结论在氧化应激状态下,使用mi R-34a的模拟物及抑制物可以调节mi R-34a的表达,改变SIRT1中蛋白的表达。内皮祖细胞功能障碍可能与mi R-34a水平升高及其靶蛋白SIRT1的表达下降相关。

• 单位
  青岛大学; 临沂市人民医院; 潍坊医学院