蛋白连接组织生长因子表达腺病毒的构建及其基因功能

作者：宫宁; 章华兵; 方福德; 常永生

来源：中国医学科学院学报, 2011, (06): 649-653+719.

DOI：10.3881/j.issn.1000-503X.2011.06.013

• 蛋白连接组织生长因子
• 过表达
• 腺病毒
• 饥饿 connective tissue growth factor
• over-expression
• adenovirus
• starving

目的构建及鉴定蛋白连接组织生长因子(CTGF)基因过表达腺病毒,初步探究CTGF在糖脂代谢方面的功能。方法克隆CTGF过表达质粒,定向克隆入穿梭载体pAdTrack-CMV,Pme I酶切线性化穿梭质粒转化改造的E.coliBJ5183(含腺病毒载体pAdEasy-1)感受态细菌产生重组腺病毒载体,用Pac I线性化重组质粒,回收转染293A细胞包装病毒颗粒,经过3轮扩增,感染肝原代细胞,观察感染效率及检测基因表达情况。通过对小鼠不同时间段的饥饿处理,提取肝脏RNA做RT-PCR,实时定量PCR检测CTGF基因在不同营养条件下的变化情况。结果成功包装CTGF的腺病毒,感染效率达90%以上。CT...

• 单位
  医学分子生物学国家重点实验室; 中国医学科学院北京协和医学院