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摘要
目的研究 RNA 干扰技术对大鼠胸膜间皮细胞水通道蛋白1(AQP1)基因表达的影响,探讨应用该技术治疗胸腔积液的可行性。方法体外培养大鼠胸膜间皮细胞,细胞鉴定后,采用免疫细胞化学、逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测 AQP1表达;设计并构建2个靶向大鼠AQP1基因的短发夹 RNA(shRNA)重组质粒,脂质体转染大鼠胸膜间皮细胞48 h 后,采用 RT-PCR 及Western 印迹方法分别在 mRNA 和蛋白质水平检测 AQP1基因表达的抑制效果。结果胸膜间皮细胞存在 AQP1表达,所设计的2个 AQP1-siRNA 重组质粒可不同程度地抑制 AQP1在胸膜间皮细胞中的表达,在 mRNA 水平抑制率分别为83.5%和90.9%;在蛋白质水平抑制率分别为41.2%和67.6%,与空白对照组和阴性对照组比较,其差异有统计学意义(P<0.01)。结论质粒介导的 RNA干扰可明显抑制大鼠胸膜间皮细胞 AQP1基因的表达,且抑制率具有序列相关性,是潜在的胸腔积液基因治疗新方法。
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