HPLC-MS/MS间接测定类风湿关节炎患者红细胞中多聚谷氨酸化甲氨蝶呤的浓度

作者：杜思颖; 吕佩瑜; 温悦; 林小青; 欧阳华^*

来源：中国药学杂志, 2019, 54(22): 1876-1881.

• 高效液相色谱-串联质谱法
• 多聚谷氨酸化甲氨蝶呤
• 甲氨蝶呤
• 红细胞
• 类风湿关节炎

目的建立检测类风湿关节炎患者红细胞中多聚谷氨酸化甲氨蝶呤(methotrexate polyglutamates,MTXPGs)浓度的HPLC-MS/MS法。方法采用间接测定法,以同位素甲氨蝶呤-d3为内标,分别测定游离甲氨蝶呤(methotrexate,MTX)和总MTX(MTX+MTXPGs),从而计算出红细胞中MTXPGs浓度。为测定游离MTX,全血样品经反复冻融、甲醇沉淀蛋白后,经LC-MS/MS进样分析,采用电喷雾离子源(ESI)正离子模式,多反应监测(MRM)。为测定总MTX,样品(反复冻融后)与200mmol·L-1抗坏血酸37℃孵育2. 5 h,酶促MTXPGs转化为MTX,蛋白沉淀后进样分析。结果全血MTX质量浓度在1～300ng·m L-1内线性关系良好(r=0. 999 4),检测限(LOD)为0. 5 ng·m L-1,准确度(RE)在±5%内,日内和日间精密度(RSD)分别低于7. 96%和10. 88%。结论本方法快速、灵敏,具有高专属性和重现性,成功应用于临床上类风湿关节炎患者红细胞中MTXPGs浓度的监测。

• 单位
  厦门大学附属中山医院; 厦门大学