多聚甲醛固定对流式细胞术检测人外周血淋巴细胞亚群的影响

作者：杨锐创; 胡燕; 屈蒙蒙; 毕京峰; 高鸿雁; 柴燕涛; 孙慧伟; 冯帆; 王志杰; 邢小燕^*; 侯俊^*

来源：临床检验杂志, 2020, 38(10): 729-733.

DOI：10.13602/j.cnki.jcls.2020.10.02

• 流式细胞术
• 多聚甲醛
• 淋巴细胞亚群
• 平均荧光强度

目的考察多聚甲醛(PFA)浓度和固定时间对流式细胞术检测人外周血T、B、NK淋巴细胞亚群百分比和平均荧光强度的影响。方法以健康人外周血为研究对象,将六色荧光抗体标记后溶血处理的细胞分别用PBS、1%PFA(10 g/L)和4%PFA(40 g/L)进行重悬或固定,用流式细胞仪在固定0、4、8、12、24、48和72 h后检测CD19-CD3+T、CD3+CD4+T、CD3+CD8+T、CD3-CD19+B、CD3-CD56+NK细胞占淋巴细胞百分比,及CD45、CD3、CD4、CD8、CD19、CD56的平均荧光强度。结果与PBS对照组相比,72 h内,PFA浓度及固定时间对外周血T、B、NK淋巴细胞亚群百分比均没有影响(P均>0.05);固定8 h内,PBS对各淋巴细胞亚群平均荧光强度均无影响,1%PFA组CD4平均荧光强度下降,4%PFA组CD45、CD3、CD4、CD8平均荧光强度均下降;固定24 h后,各淋巴细胞亚群平均荧光强度均下降,同时4%PFA固定后平均荧光强度均低于1%PFA(P<0.05)。结论使用流式细胞术检测人外周血淋巴细胞亚群,细胞染色后若8 h内检测用PBS进行细胞重悬检测效果最好,PFA固定不应超过12 h,1%PFA固定效果优于4%PFA。

• 单位
  锦州医科大学; 解放军总医院; 中国医学科学院药用植物研究所