改良消减杂交技术用以筛选差异表达非编码小RNA的应用初探

作者：王燕; 彭莉萍; 陈锦珍; 刘星; 罗镇明; 周天会

来源：生物技术通报, 2013, (02): 146-150.

DOI：10.13560/j.cnki.biotech.bull.1985.2013.02.031

• 非编码小RNA
• 消减杂交
• 乳腺癌细胞 Small non-coding RNA Subtractive hybridization Breast cancer cell

旨在构建一种能快速、有效检测不同细胞中差异表达的非编码小RNA的方法。以乳腺癌细胞株MCF7和非癌乳腺上皮细胞HBL100为材料,用RNA分离试剂盒分离获得长度为18-100 nt的RNA片段,3'端添加poly(A)尾后利用smart技术进行反转录,在反转录体系中加入生物素标记的dATP,得到单链cDNA;结合生物素-磁珠分离技术将cDNA与待测RNA进行消减杂交并以U6为内参验证消减结果 ;最后利用巢式PCR扩增杂交产物,PCR产物插入T载体后,挑取阳性克隆进行测序。结果显示,总RNA按不同大小片段分离富集后通过聚丙烯酰胺凝胶电泳,于100 nt以下显示较亮条带;以U6为内参检测杂交效率,...

• 单位
  遵义医科大学; 遵义医学院珠海校区