表达分泌型脑源性神经营养因子的腺相关病毒载体的构建及其表达的检测

作者：李惠明; 裘玮; 王丰; 韦芳; 陈霞芳; 吴小兵; 黄倩

来源：生物工程学报, 2008, 24(02): 328-332.

DOI：10.3321/j.issn:1000-3061.2008.02.027

• 腺相关病毒
• 脑源性神经营养因子
• 基因表达
• 基因治疗

采用PCR和体外连接的方法构建了带有信号肽的脑源性神经营养因子(BDNF)的融合基因,将此基因插入到腺相关病毒载体穿梭质粒pSNAV,然后用重组质粒pSNAV-Ig-BDNF转染包装细胞,筛选出永久细胞株后,用携带腺相关病毒rep及cap基因的单纯疱疹病毒超感染包装细胞,成功包装出含有目的基因的一型血清型腺相关病毒。经PCR鉴定该病毒含有目的基因片段,被该病毒感染的细胞裂解液经Western blotting证实有BDNF表达,其培养液经ELISA检测证实含有高水平的BDNF蛋白。该病毒与小量的非复制型腺病毒Ad-null联合应用时,其BDNF蛋白的表达水平显著提高。可弥补腺相关病毒起效慢、对细胞转导效率低的弱点,为今后应用AAV作基因治疗提供了实验证据。

• 单位
  上海交通大学; 中心实验室; 中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所