环戊二烯类有机氯农药单克隆抗体的制备及鉴定

作者：肖陈贵; 顾大勇; 丁晶; 杨星星; 毕思远; 朱海; 岳振峰; 侯乐锡

来源：食品安全质量检测学报, 2014, 5(11): 3425-3430.

DOI：10.19812/j.cnki.jfsq11-5956/ts.2014.11.011

• 环戊二烯类农药
• 间接ELISA
• 单克隆抗体

目的制备并鉴定环戊二烯类有机氯农药单克隆抗体。方法以环戊二烯类农药的特征部分为基础设计合成半抗原4-(4,5,6,7,8,8-六氯-3a,4,7,7a-四氢-4,7-亚甲基-1H-聚-1-氧)4-丁酮酸(CCD),并通过活泼酯法将其与载体蛋白BSA、OVA分别偶联制备免疫抗原CCD-BSA和包被抗原CCD-OVA;再经过动物免疫、细胞融合,筛选、克隆,得到1株能稳定分泌环戊二烯类农药抗体的单克隆细胞株。细胞株经扩大培养后,注射小鼠体内产生腹水,并将其用辛酸-硫酸铵和protein A柱子纯化出单克隆抗体。结果 用间接ELISA方法测定其效价为2.5×104,亲和力Ka为6.7×1010L/mol;以β-硫丹为竞争物,采用间接竞争ELISA法建立标准曲线,测得其IC50为16.2 ng/m L,LOD为2.1 ng/m L,定量检测线性范围为4.7117.5 ng/m L,与其他5种结构类似物的交叉反应率高于10%。结论 本研究成功获得了抗环戊二烯类农药单克隆抗体,该抗体可实现果蔬中环戊二烯类农药的多残留快速检测。

• 单位
  深圳市检验检疫科学研究院; 深圳市易瑞生物技术有限公司