非洲猪瘟病毒B602L蛋白的真核表达及多克隆抗体的制备

作者：刘郁夫; 林晓慧; 郝文茜; 冯夏宁; 欧阳征亮; 陈瑞爱^*

来源：中国兽药杂志, 2023, 57(10): 1-8.

• 非洲猪瘟
• B602L
• 真核表达
• 多克隆抗体

为表达非洲猪瘟病毒B602L重组蛋白，制备相应的多克隆抗体，根据NCBI网站上公布的非洲猪瘟病毒(Pig/HLJ/2018株)B602L基因序列进行密码子优化和基因合成，随后克隆至杆状病毒转移载体pFastBac1中，获得重组杆状病毒质粒，再把重组杆粒转染昆虫细胞Sf9,拯救重组B602L基因的杆状病毒。经间接免疫荧光和western blots鉴定结果显示，B602L重组蛋白与His标签抗体、非洲猪瘟标准阳性血清均能发生特异性反应，并且B602L重组蛋白可以细胞分泌上清的形式进行表达。通过His镍株亲和纯化的方式纯化重组蛋白，B602L蛋白大小约70 ku,与预期相符。将B602L重组蛋白与弗氏佐剂配比免疫BALB/c小鼠，制备小鼠多克隆抗体，经间接ELISA检测，该抗体效价可达1∶512000,并且与B602L重组蛋白具有良好的反应性。本研究可为进一步研究非洲猪瘟B602L蛋白的结构与功能、研制非洲猪瘟诊断制品提供生物材料。

• 单位
  肇庆大华农生物药品有限公司; 肇庆学院; 生命科学学院