高山被孢霉NADP-IDH的异源表达与活性分析

作者：王旭旭; 孙晓琪; 陈海琴; 赵建新; 陈卫; 唐鑫

来源：食品与发酵工业, 2022, 1-9.

DOI：10.13995/j.cnki.11-1802/ts.031576

• 高山被孢霉
• 异柠檬酸脱氢酶
• 异源表达
• 酶活性
• 酶产量

产油真菌胞质中NADP~(+)依赖型异柠檬酸脱氢酶（isocitrate dehydrogenase， IDH）能够为脂肪酸合成提供还原力，前期研究表明高山被孢霉的异柠檬酸脱氢酶4（Mortierella alpina isocitrate dehydrogenase4， MaIDH4）对脂质积累有积极的影响。为了深入研究MaIDH4的性质，该文将其在大肠杆菌和毕赤酵母系统中分别进行异源表达并纯化，均成功获得纯酶，并考察了不同表达系统对酶活性和产量的影响。首先克隆MaIDH4至表达载体pET28a(+)和pPink-HC-3CZHEK构建重组质粒，然后分别转化至Escherichia coli BL21(DE3)和PichiaPink~(TM) Strain 2进行诱导表达，最后采用镍柱纯化获得携带10×His标签的MaIDH4重组酶，检测纯酶的比活力分别是112.26和178.57 mmol/(min·mg protein)，酶产量分别为2.14和47.74 U/L。通过纯酶比活力和酶产量分析表明相比于大肠杆菌表达系统，毕赤酵母宿主更适合MaIDH4的异源表达。

• 单位
  江南大学