小鼠肺组织内造血干细胞分离、纯化与诱导分化为树突细胞的实验研究

作者：李怡; 王晓旭; 冯玫^*

来源：中国实验血液学杂志, 2019, 27(04): 1272-1276.

DOI：10.19746/j.cnki.issn1009-2137.2019.04.046

• 肺组织
• 造血干细胞
• 树突细胞

目的:探索小鼠肺组织内造血干细胞分离、纯化与诱导分化为树突细胞(dendriric cell,DC)的方法,为小鼠肺组织内造血干细胞的相关研究提供理论基础和实验方法。方法:4只雄性C57小鼠肺组织经I型胶原酶、I型DNA酶和淋巴细胞分离液消化、分离、纯化为单个核细胞,采用流式细胞仪鉴定和分选Lin-Sca-1+c-Kit+细胞即造血干细胞(HSC)。向所获得的HSC加入干细胞因子(SCF)和白介素(IL)-3促进细胞增殖。停用SCF和IL-3后,加入粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)和IL-4将HSC诱导分化为DC,加入脂多糖(LPS)促细胞成熟。倒置显微镜下观察DC形态,流式细胞术分析DC细胞表面分子CD11c、MHC-II、CD80和CD86的表达,酶联免疫吸附技术(ELISA)检测IL-12表达水平。结果:从流式细胞仪分选鉴定的4只小鼠肺组织单个核细胞中,共收集HSC2419. 67±247. 59个,纯度7. 16%±0. 43%。HSC经SCF和IL-3诱导7 d后扩增62. 34±3. 23倍;诱导培养15 d后获得成熟的树突状细胞,细胞表面具有典型的树枝状突起,高表达树突状细胞特异性表面分子CDllc(92. 62±3. 68)%、MHC-II(75. 96±5. 13)%、CD80(72. 07±4. 38)%、CD86(83. 89±6. 28)%。ELISA检测IL-12的表达水平为136. 12±16. 59 pg/ml。结论:肺组织内存在HSC,可经细胞因子增殖诱导向DC转化。

• 单位
  山西医科大学