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摘要
本发明公开一种ε-己内酯高产菌株的高通量筛选方法,属于高通量筛选技术领域。本发明将ADH和CHMO双酶级联反应产物ε-己内酯的浓度与中间产物环己酮的浓度进行相关性分析发现,具有不同催化性能的菌株在全细胞催化反应后,中间产物环己酮浓度与产物ε-己内酯浓度呈负相关关系,因此以环己酮为筛选标记,通过高通量筛选具有低环己酮浓度的菌株得到高产ε-己内酯的菌株。本发明利用RBS工程技术构建ε-己内酯产生菌的突变文库,筛选得到的七株突变菌株并进行摇瓶实验验证,催化70mM环己醇的ε-己内酯产量,与出发菌株RCL0相比均获得显著提高。该方法操作步骤简单,可大幅降低菌株筛选过程的实验成本并缩短筛选周期。
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