百日咳丝状血凝素与志贺毒素B亚单位的融合表达及其免疫保护效果评价

作者：刘兆禄; 朱力; 潘超; 卢瑛^*; 王恒樑^*

来源：中国生物制品学杂志, 2021, 34(05): 511-516.

DOI：10.13200/j.cnki.cjb.003327

• 百日咳
• 丝状血凝素
• 志贺毒素B亚单位
• 融合蛋白
• 免疫效果

目的融合表达百日咳丝状血凝素(filamentous haemagglutinin,FHA)片段FHA1877-2250与志贺毒素B亚单位(Shiga toxin B subunit,StxB)蛋白,并对融合蛋白StxB-Fha1877-2250的免疫保护效果进行评价。方法设计引物将StxB片段连接至FHA1877-2250N-端,构建重组表达质粒pET-28a-FHA1877-2250和pET-28a-StxB-Fha1877-2250,转化大肠埃希菌BL21(DE3),IPTG诱导表达。表达的重组蛋白经镍柱亲和层析和复性后,通过皮下免疫小鼠,共3次,间隔2周。末次免疫后10 d,尾静脉采血,间接ELISA法检测血清抗体效价;血清体外杀菌试验检测杀菌效率;末次免疫后第14天,经腹腔接种2倍半数致死剂量(1.21×108CFU)的百日咳Bp148株菌液,评价动物攻毒保护效果。结果重组表达质粒经菌落PCR和测序证实构建正确。表达的重组蛋白FHA1877-2250、StxB-Fha1877-2250经SDS-PAGE和Western blot分析显示,相对分子质量分别约为43 000和51 000。StxB-Fha1877-2250免疫小鼠血清抗体效价可达1∶3 200。StxB-Fha1877-2250组的血清杀菌效率比FHA1877-2250组略好。以百日咳Bp148菌株攻毒,FHA1877-2250、StxB-Fha1877-2250蛋白对免疫小鼠具有保护力,保护率分别为40%和60%。结论重组融合蛋白StxB-Fha1877-2250相比于FHA1877-2250具有更好的免疫原性和保护效果,为百日咳亚单位疫苗的研究提供了新的思路。

• 单位
  上海海洋大学