花鲈Phoenixin-20基因克隆及饥饿复投喂对其表达的影响

作者:李太初; 邱丽华; 张瑞琼; 闫路路; 赵超; 张博; 张博; 乔秀亭; 王鹏飞*
来源:南方农业学报, 2023, 54(09): 2637-2645.

摘要

【目的】明确花鲈Phoenixin-20基因(LmPNX-20)是否参与花鲈的摄食调控过程,进而揭示PNX-20在鱼类摄食调节机制中的作用,同时为丰富和完善花鲈内分泌调控网络提供理论依据。【方法】通过PCR和RACE克隆LmPNX-20基因序列,采用ExPASy、SignalP 5.0、ProtScale、NetPhos 3.1及ClustalX等在线软件进行生物信息学分析,并以实时荧光定量PCR检测分析LmPNX-20基因在花鲈各组织中的表达特征及不同饥饿复投喂策略[正常投喂(F)、饥饿3 d(H3)、饥饿3 d复投喂1 d(R3-1)、饥饿3 d复投喂2 d(R3-2)、饥饿3 d复投喂3 d(R3-3),以及饥饿7 d(H7)、饥饿7 d复投喂1d(R7-1)、饥饿7d复投喂2d(R7-2)、饥饿7d复投喂3d(R7-3)]对LmPNX-20基因表达的影响。【结果】LmPNX-20基因开放阅读框(ORF)长度为210 bp,共编码69个氨基酸残基;其编码蛋白分子量为7.87 kD,理论等电点(pI)为9.85。LmPNX-20氨基酸序列含有5个磷酸化位点,但不存在信号肽;LmPNX-20氨基酸序列与硬骨鱼类的PNX-20氨基酸序列相似性较高,为69.70%~89.86%。LmPNX-20基因在花鲈脑组织中呈广泛表达分布,尤其在垂体和下丘脑中的相对表达量较高。经饥饿复投喂处理后花鲈幼鱼全脑组织中的LmPNX-20基因表达发生明显变化,在经历3和7 d饥饿复投喂1 d的花鲈幼鱼全脑组织中LmPNX-20基因的相对表达量显著上调(P<0.05);且与饥饿3 d复投喂的花鲈幼鱼相比,饥饿7 d复投喂的花鲈幼鱼全脑组织LmPNX-20基因表达均呈上调趋势。【结论】LmPNX-20基因在鱼类的进化过程中较保守,且在生长轴(下丘脑、垂体和肝脏)和生殖轴(下丘脑、垂体和性腺)有较高表达水平,可能参与花鲈的生长及生殖等生理过程。不同饥饿复投喂处理影响花鲈幼鱼全脑组织LmPNX-20基因的表达,复投喂后该基因表达量明显升高,说明LmPNX-20基因对花鲈幼鱼摄食调控具有一定促进作用。