TACE基因shRNA真核表达载体的构建及其对HeLa细胞生物学活性的影响

作者：章杰; 闫媛; 杨渝珍; 杨业金

来源：华中科技大学学报(医学版), 2008, (04): 426-430.

• 肿瘤坏死因子转换酶
• 小发夹结构RNA
• HeLa细胞
• 细胞凋亡

目的构建靶向肿瘤坏死因子转换酶(TACE)的小发夹结构RNA(shRNA)的真核表达载体,观察干扰TA-CE表达对HeLa细胞增殖和凋亡的影响。方法设计针对TACE基因的4个shRNA序列,构建真核表达载体shR-NA1、shRNA2、shRNA3、shRNA4。通过酶切和测序等方法进行鉴定。转染HeLa细胞后,用Realtime PCR的方法检测其对HeLa细胞TACE基因表达的影响;用ELISA检测细胞分泌的sTNF-α,间接反映干扰TACE的效果;用MTT法检测细胞增殖活性;用DNA ladder和流式细胞术检测细胞凋亡。结果成功构建和筛选出了针对TACE基因的3个有效的特异性真核表达载体,且均在不同程度上抑制了HeLa细胞TACE基因的表达。ELISA检测结果与Realtime PCR实验结果相符。同时发现干扰TACE基因后,HeLa细胞的生长受到抑制,凋亡率升高,与对照组相比差异有显著性意义(P<0.05)。实验组转染shRNA1~3后72h可见特征性的基因组DNA ladder条带。结论所构建的TACEshR-NA真核表达载体能显著抑制TACE的表达。干扰TACE基因的表达可有效抑制HeLa细胞的增殖并诱导其凋亡。

• 单位
  基础医学院; 华中科技大学同济医学院