miR-148a-3p靶向Wnt1基因对人牙髓干细胞增殖活力及成骨分化的影响

作者：吴东; 朱青青; 高振杰

来源：口腔颌面修复学杂志, 2023, 24(05): 335-341.

DOI：10.19748/j.cn.kqxf.1009-3761.2023.5.003

• 微小RNA-148a-3p
• 无翅型MMTV整合位点家族蛋白1
• β-连环蛋白
• 牙髓干细胞
• 增殖
• 成骨分化

目的：观察微小RNA(miRNA)-148a-3p对人牙髓干细胞（DPSCs）增殖活力及成骨分化的影响，并探讨可能机制。方法：取对数期DPSCs，分为空白组、NC组、inhibitor组、inhibitor+XAV939[无翅型MMTV整合位点家族蛋白（Wnt）/β-连环蛋白（β-catenin）信号通路抑制剂]组。空白组不处理，NC组转染阴性对照质粒miR-148a-3p NC,inhibitor组转染miR-148a-3p inhibitor,inhibitor+XAV939组转染miR-148a-3p inhibitor并加入XAV939(40μmol/L)。转染48 h后qRT-PCR法检测miR-148a-3p表达量；MTT法检测增殖活力；ELISA法检测碱性磷酸酶（ALP）活性；茜素红染色法检测矿化能力；双荧光素酶实验验证miR-148a-3p靶向基因；Western blot法检测糖原合成酶激酶3β(GSK-3β)、β-catenin、Runt相关转录因子2(Runx2)、牙本质涎磷蛋白(DSPP)、牙本质基质蛋白1(DMP-1)以及Wnt1蛋白相对表达量。结果：与空白组、NC组比较，inhibitor组24 h、48 h、72 h吸光度值，GSK-3β蛋白表达量降低，ALP活性值，矿化结节面积占比，β-catenin、Runx2、DSPP、DMP-1以及Wnt1蛋白表达量升高（P<0.05）；与inhibitor组比较，inhibitor+XAV939组24 h、48 h、72 h吸光度值，GSK-3β蛋白表达量升高，ALP活性值，矿化结节面积占比，β-catenin、Runx2、DSPP、DMP-1以及Wnt1蛋白表达量降低（P<0.05）。结论：抑制miR-148a-3p表达可提升DPSCs增殖活力并促进其成骨分化，推测其作用机制与负向调控下游的靶基因Wnt1有关。

• 单位
  郑州大学第一附属医院; 河南省口腔医院