犬圆环病毒Rep基因SYBR GreenⅠreal-time PCR方法的建立及应用

作者：韩知晓; 杜倩; 汪伟; 辛佳亮; 闫修魁; 梁莹莹; 朱远致; 何玄; 曹亮; 孙文超^*; 胡传活^*; 郑敏^*

来源：中国兽医科学, 2019, 49(12): 1520-1526.

DOI：10.16656/j.issn.1673-4696.2019.0208

• 犬圆环病毒
• SYBR GreenⅠreal-time PCR
• Rep基因

为建立一种检测犬圆环病毒的快速诊断方法,本试验拟采用普通PCR方法扩增犬圆环病毒Rep基因,将目的基因克隆到T-Vector pMD19 (Simple),以测序正确的重组质粒作为模板,建立针对犬圆环病毒Rep基因的SYBR GreenⅠreal-time PCR检测方法,并对该方法进行敏感性、特异性和重复性试验。结果显示,Ct值与标准品在6.18×109～6.18×102copise/μL范围内呈良好的线性关系,其相关性为0.998,斜率为-3.671。检测下限为6.18×101copies/μL,且对猪圆环病毒2型、猪圆环病毒3型、犬瘟热病毒、犬传染性肝炎病毒、犬细小病毒、犬副流感病毒、犬腺病毒2型、狂犬病病毒等均无特异性扩增,所有稀释度标准品模板均在86.45℃出现特异性熔解峰。通过对临床样品进行检测,本方法对犬圆环病毒核酸的检出率为9.72%(7/72)。结果表明,本试验成功建立了针对犬圆环病毒Rep基因的SYBR GreenⅠreal-time PCR方法,可实现对犬圆环病毒快速、灵敏及准确的诊断。

• 单位
  吉林医药学院; 广西大学; 沈阳农业大学; 广西壮族自治区动物疫病预防控制中心; 温州大学