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摘要
为了深入研究牛分枝杆菌PPE13在病原-宿主相互作用中的具体机制，本研究利用慢病毒表达系统构建了PPE13稳定表达的THP-1细胞系。首先，采用分子克隆技术，以牛分枝杆菌基因组DNA为模板扩增出ppe13目的片段，然后采用酶切、酶链、转化等获得含有ppe13片段的重组慢病毒表达质粒，将该质粒和慢病毒包装质粒转染至239T细胞中，72 h后收集病毒。然后，将获得的病毒感染THP-1细胞中，经1 μg/mL嘌呤霉素筛选获得稳定表达PPE13的细胞株THP-1/PPE13。最后，使用ELISA方法检测稳定表达细胞系中TNF-α、IL-1β和IL-6分泌的情况，以验证细胞系中PPE13的生物学活性。结果显示，相较于对照细胞THP-1/Con，THP-1/PPE13中TNF-α、IL-1β和IL-6的分泌水平均显著升高。该细胞系的建立为深入研究PPE13调控细胞信号通路的功能提供了实验基础。
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单位动物科技学院; 浙江农林大学
