溴隐亭促进大鼠泌乳素瘤MMQ细胞分泌外泌体以及对细胞耐药性的影响

作者：黄华; 王福超; 谭松; 牟家民; 金彪; 杨刚^*

来源：肿瘤, 2019, 39(07): 515-524.

DOI：10.3781/j.issn.1000-7431.2019.11.145

• 催乳素瘤
• 外泌体
• 溴隐亭
• 细胞增殖
• 抗药性,肿瘤

目的:探讨溴隐亭在促进大鼠泌乳素瘤MMQ细胞分泌外泌体,及其外泌体在MMQ细胞耐药中的作用。方法:采用CCK-8法检测不同浓度的溴隐亭对MMQ细胞增殖的影响,并计算半数抑制浓度(half maximal inhibitory concentration,IC50)值。MMQ细胞在溴隐亭中暴露48 h后,采用差速离心法分离收集外泌体;在透射电子显微镜下观察外泌体形态和大小,纳米颗粒跟踪分析仪检测外泌体粒径,蛋白质印迹法检测外泌体表面标志物CD63的表达情况。用PKH67标记外泌体,在激光共聚焦显微镜下观察外泌体被MMQ细胞摄取的情况;采用CCK-8法检测外泌体被摄取后,MMQ细胞对溴隐亭敏感性的改变。实时荧光定量PCR法检测外泌体处理后对MMQ细胞中PR结构域锌指蛋白2(PR domain zincnger protein 2,PRDM2)mR NA表达的影响;蛋白质印迹法检测外泌体处理后对MMQ细胞中PRDM2、多巴胺2受体(dopamine 2 receptor,D2R)和细胞外信号调节激酶1/2(extracellular signal-regulated kinase 1/2,ERK1/2)以及磷酸化ERK1/2(phospho-ERK1/2,p-ERK1/2)表达水平的影响。结果:溴隐亭对MMQ细胞的IC50值为(52.91±1.48)μmol/L;与未用溴隐亭处理的MMQ细胞所分泌的外泌体相比,溴隐亭处理MMQ细胞所分泌的外泌体颗粒数和蛋白质含量均显著增加(P值均<0.01),但粒径没有变化。与MMQ细胞相比,仅有外泌体上有CD63的表达。溴隐亭处理MMQ细胞所分泌的外泌体可以被MMQ细胞所摄取;MMQ细胞摄取外泌体后,溴隐亭对MMQ细胞的IC50值为(73.74±1.17)μmol/L,较未摄取外泌体的MMQ细胞明显提高(P <0.01);MMQ细胞摄取外泌体后,MMQ细胞中PRDM2 mRNA和蛋白的表达水平明显下调(P值均<0.05),D2R蛋白的表达水平也明显降低(P <0.05),p-ERK1/2蛋白的表达水平升高(P <0.05)。结论:溴隐亭可促进大鼠泌乳素瘤MMQ细胞分泌外泌体,并且在溴隐亭治疗时所产生的外泌体可通过在肿瘤细胞间传递信息,从而使MMQ细胞获得耐药性。

• 单位
  重庆医科大学附属第一医院