TNF-α/ActD协同内质网应激通过调控糖原合成酶激酶3β促进肝细胞凋亡

作者：时红波; 时红林; 张向颖; 陈德喜; 段钟平; 任锋

来源：胃肠病学和肝病学杂志, 2017, 26(09): 1006-1010.

• 内质网应激
• 肿瘤坏死因子
• 放线菌素D
• 细胞凋亡
• 糖原合成酶激酶3β

目的研究肿瘤坏死因子(tumor necrosis factorα,TNF-α)和放线菌素D(Actinomycin D,ActD)与内质网应激(endoplasmic reticulum stress,ERS)诱导肝细胞凋亡的相互作用及分子机制。方法分离小鼠原代肝细胞,应用TNF-α和ActD联合诱导的肝细胞凋亡,分别给予ERS激活剂(Tunicamycin,TM)和抑制剂(4-phenylbutyrate,4-PBA),检测细胞上清中分泌的乳酸脱氢酶(LDH)和细胞中caspase-3的表达;在TNF-α/ActD诱导凋亡的基础上,加入4-PBA抑制ERS,检测ERS相关蛋白和糖原合成酶激酶3β(Glycogen synthase kinase 3β,GSK3β)的表达情况。最后在TNF-α/ActD诱导凋亡和TM激活ERS的基础上,加入GSK3β抑制剂(SB216763),检测原代肝细胞凋亡情况。结果 TNF-α/ActD可以明显诱导肝细胞分泌LDH,加入TM后,肝细胞分泌LDH和表达的caspase-3明显增多,而加入4-PBA后,肝细胞分泌LDH和表达的caspase-3明显减少。TNF-α/ActD明显促进了Grp78和CHOP的表达,促进ERS的活化;ERS抑制增强GSK3β磷酸化水平,降低GSK3β活性,但TNF-α/ActD对GSK3β活性无明显影响;TNF-α/ActD可以直接诱导肝细胞发生凋亡,加入TM后,凋亡的细胞明显增多,但是加入GSK3β抑制剂后,细胞凋亡明显减少。结论TNF-α/ActD协同ERS诱导了肝细胞的凋亡,其分子机制可能与GSK3β的活化有关。

• 单位
  北京市肝病研究所; 首都医科大学附属北京佑安医院