杜氏盐藻硝酸盐还原酶基因5′上游序列的克隆与功能分析

作者：李杰; 贾岩龙; 闫红霞; 潘卫东; 薛乐勋

来源：中国生物工程杂志, 2006, (11): 1-7.

DOI：10.13523/j.cb.20061101

• 杜氏盐藻
• 硝酸盐还原酶基因
• 5&prime
• 上游序列
• 功能

目的:克隆杜氏盐藻硝酸盐还原酶(NR)基因5′上游序列,并对其功能进行分析。方法:利用BamHI、EcoRI、HindIII、PstI、SalI、Xbal6种限制性内切酶分别酶切盐藻基因组DNA,并与接头连接,构建成盐藻基因组步行文库。采用LA-PCR方法,从上述盐藻步行基因组文库中扩增NR基因5′上游序列,测序并进行分析。为检测其表达特性,构建了该片段与GUS嵌合基因的表达载体pNR-GUS,通过电击法将所构建的重组表达载体转化盐藻,组织化学染色法观察GUS的表达。结果:从盐藻基因组步行文库中扩增出约1200bp特异片段,序列分析表明5′上游序列含有启动子的特征性序列。GUS瞬时表达染色结果显示,该DNA片段具有硝酸盐诱导和铵抑制的启动子活性。结论:所克隆的盐藻的5′上游序列可能是一种具有“开关”活性的可控性启动子。

• 单位
  郑州大学; 郑州大学第一附属医院